6株金黄色葡萄球菌菌株的鉴定

目的 对6株金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus,简称金葡菌)菌株进行鉴定,为研制相关疫苗提供参考.方法 将稀释的6株疫苗研制用备选金葡菌菌株49521、12602、49525、12605、55804、10832及质控菌株25923、12228菌悬液划线接种TSA平板及Columbia血平板,观察菌落形态,并涂片染色镜检;利用API Staph生化试剂盒、staphylase test血浆凝固酶检测试剂盒及30μg头孢西丁药敏纸片对菌株进行鉴定;利用PCR法鉴定菌株16S rRNA基因、荚膜基因型及mecA基因;用系列稀释的菌悬液经腹腔注射BALB/c小鼠,初步测定菌株毒力.结果 6株金葡菌经平板培养,可见圆形、凸起、不透明、有光泽的菌落,Columbia血平板培养的菌落周围可见透明溶血环,镜检结果为革兰阳性球菌,呈单、双或葡萄串状排列.6株菌株的生化反应结果相同,且与质控菌株25923反应结果一致;6株菌株的凝固酶试验结果均为阳性,均对头孢西丁敏感,均未扩增出mecA基因片段,为甲氧西林敏感菌株(methicillin sensitive Staphylococcus aureus,MSSA).6株菌株均扩增出1 544 bp的16S rRNA基因片段,与GenBank中的参考序列NR_075000.1的同源性均为99％;菌株49521、12605、55804、10832均扩增出340 bp的cap5基因片段,与GenBank中序列U81973.1的同源性为99％～ 100％;菌株12602、49525均扩增出171 bp的cap8基因片段,与GenBank中序列U73374.1的同源性均为100％.6株菌株的半数致死量(LD50)均在2.5× 108～2.5× 109CFU之间.结论 对6株疫苗研制用备选金葡菌进行了鉴定,为疫苗研制中菌株鉴定及不同荚膜型菌株的选择提供了参考.