嗜热β-葡萄糖苷酶的原核表达、纯化及其活性

目的 原核表达、纯化嗜热β-葡萄糖苷酶,并检测其活性.方法 从嗜热细菌Fervidobacterium pennivorans基因组DNA中PCR扩增β-葡萄糖苷酶基因,插入原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒,转化E.coli BL21(DE3) CodonPlus,筛选阳性重组菌,IPTG诱导表达.采用镍柱亲和层析法纯化重组酶;紫外吸收法检测酶活力和底物选择性.结果 PCR退火温度为67℃时,可扩增得到单一的目的基因条带;测序结果显示,重组表达质粒中目的基因的核苷酸序列与细菌基因组中该基因序列同源性为100％,未发现终止密码子及氨基酸的改变;表达的重组酶相对分子质量约为54 000;纯化的目的蛋白纯度达95％,浓度为10 mg/L;该重组酶能够高效催化对硝基苯-β-D-葡萄糖苷(pNPG)的水解,60℃条件下的比活力达124 293.5 U/mg.结论 成功在E.coli中表达了嗜热细菌Fe rvidobacterium pennivorans来源的具有较高催化活力和底物专一性的β-葡萄糖苷酶.