基于16S rRNA的聚合酶链反应技术用于肺部感染患者痰标本中军团菌的检测

目的 建立实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)方法,检测肺部感染患者痰液中军团菌属特异性16S rRNA基因.方法 利用军团菌属特异性16S rRNA基因保守序列设计引物和探针,优化反应条件和反应体系,对嗜肺军团菌、非嗜肺军团菌及其他病原菌标准菌株进行检测,验证该方法的特异性和敏感性.对150例肺部感染患者痰液标本进行检测,阳性者对基因扩增产物测序作验证试验.结果 该方法检测军团菌属所有标准菌株均出现阳性信号,其他非军团菌属检测结果均为阴性,灵敏度为10 cfu/ml.150例肺部感染患者的痰液标本,经荧光定量PCR法检出军团菌阳性27例,阳性率为18.0％(27/150),经16S rRNA基因测序验证,阳性率为15.0％(22/150),经,检验二者差异无统计学意义(x2=3.2,P＞0.05),表明其较好的符合性和等效性.结论 realtime PCR法检测患者痰液标本中军团菌,具有快速、敏感、特异等特点,适用于临床军团菌感染调查及快速检测.