当归芍药散对AD细胞模型铜离子介导的Aβ聚集的影响

目的:以β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)和铜离子(Cu2+)络合物作用的入神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞为阿尔茨海默病(AD)模型,探讨Cu2+对Aβ聚集方式和神经毒性的影响及当归芍药散对Cu2介导的Aβ毒性的AD细胞模型的影响.方法:将Aβ1-42(20 μmol· L-1)与不同浓度硫酸铜(CuSO4,20,40μmol·L-1)反应后用硫黄素T(ThT)染色法检测Aβ聚集状态,再进行Aβ1-42-Cu2+组(20+ 20μmol·L-1),当归芍药散组(1.6,3.2,6.4 mg·L-1)ThT染色检测Aβ聚集状态.培养SH-SY5Y细胞,分别孵育不同浓度的Aβ1-42(1.25,2.5,5,10,20,40 μmol·L-1)及当归芍药散(1.6,3.2,6.4,12.8 mg·L-1),24 h后行噻唑蓝(MTT)比色法确定Aβ1-42损伤浓度和当归芍药散保护浓度.随后将SH-SY5Y细胞分为空白组,Aβ1-42-Cu2+组(20+20 μmol·L-),当归芍药散组(20 μmol·L-1+ 20μmol·L-1+ 1.6 mg·L-1),空白组加入培养基,共作用24 h后行MTT比色法检测细胞生存率,显微镜拍摄细胞形态,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测胞内胞外Aβ1-42聚集状况.结果:与Aβ1-42组比较,Cu2+和Aβ1-42结合成更多更大的Aβ聚集物.与正常组比较,模型组细胞活力明显降低(P ＜0.05,P＜0.01),增加细胞内外Aβ142聚集(P＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,当归芍药散能提高Aβ1-42-Cu2+损伤的SH-SY5Y的细胞生存率(P ＜0.05,P＜0.01),减少胞外Aβ1-42蛋白(P＜0.05,P＜0.01).结论:Cu2+能够增加Aβ的聚集及毒性;当归芍药散能明显减轻Cu2+介导的Aβ聚集导致的SH-SY5Y细胞损伤,使Aβ内吞,减少胞外Aβ聚集,提高细胞生存率.