基于测序技术探究卡介菌生物制剂核酸物质基础

目的 明确免疫调节剂卡介菌多糖核酸注射液中起免疫增强作用的核酸物质基础.方法 (1)核酸提取:试剂盒法分离提取卡介菌及卡介菌多糖核酸注射液的核酸部分;(2)测序:采用第三代测序技术和第二代宏测序技术分别对卡介菌基因组和注射液核酸片段序列进行测序,获得核酸序列;(3)数据分析:统计分析核酸序列中免疫功能的含胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤(cytosine-phosphoric acid-guanine,CpG)的典型CpG基序数量及分布情况;(4)免疫活性分析:采用酶联免疫法分析提取核酸刺激细胞释放免疫因子TNF-α效果.结果 注射液核酸片段中平均每拷贝含有4 000个典型CpG基序,占总基因组的0.5％;富含CpG基序核酸片段刺激细胞释放TNF-α浓度显著强于无CpG基序核酸片段(P＜0.01),显示了较强的免疫调节作用.结论 卡介菌多糖核酸注射液核酸物质中富含CpG基序而表现较强的免疫活性,为进一步开发新型免疫调节制剂提供理论基础.