基于mTOR介导的线粒体自噬探讨左归降糖解郁方对DD海马NVU神经元损伤的保护作用

目的:基于mTOR介导的线粒体自噬探讨左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症(DD)神经血管单元(NVU)中海马神经元损伤的保护作用.方法:原代分离、纯化和培养SD大鼠海马神经元(Ne)、星形胶质细胞(As)与脑微血管内皮细胞(Bm),并分别进行细胞鉴定.采用Transwell小室及高糖联合皮质酮干预构建DD海马NVU细胞模型,实验设正常组、模型组、GluR2阻断剂组、mTOR阻断剂、左归降糖解郁方含药血清组、GluR2阻断剂+左归降糖解郁方含药血清组和mTOR阻断剂+左归降糖解郁方含药血清组.采用CCK-8法检测海马神经元细胞存活率;Hoechst染色法检测海马神经元凋亡;免疫荧光检测自噬标志物LC3-Ⅱ、SQSTM1、Parkin及mTOR途径关键蛋白(GluR2、AMPK、mTOR)表达水平.结果:左归降糖解郁方能提高模拟DD环境下NVU中海马神经元细胞存活率(P＜0.01),减少海马神经元凋亡,降低自噬标志物LC3-Ⅱ、SQSTM及Parkin水平(P＜0.05,P＜0.01),并显著抑制mTOR通路中GluR2、mTOR表达下调及AMPK表达上调(P＜0.05,P＜0.01).结论:左归降糖解郁方对线粒体自噬介导的DD海马NVU神经元损伤具有明显的保护作用,其提高细胞活力及抗凋亡的机制可能与调控mTOR途径有关.