黄芪甲苷Ⅳ诱导小鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化机制的研究

目的:探讨黄芪甲苷Ⅳ体外对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向神经细胞分化的影响,考察其诱导过程对Wnt3a 、β-catenin及Notch-1的影响.方法:在小鼠骨髓腔中提取出新鲜的BMSCs,MTT法检测细胞活性;流式细胞术检测CD29、CD34、CD90表达.分别用黄芪甲苷Ⅳ、βME及黄芪甲苷Ⅳ+βME(联合组)作用于BMSCs,倒置显微镜及扫描电镜下观察细胞形态学变化;免疫荧光检测NSE、Nestin蛋白表达;Western blot检测Wnt3a、β-catenin、Notch-1蛋白表达;RT-qPCR检测Nestin、NSE、Axin、Wnt3a、β-catenin、Notch-1 mRNA的表达.结果:MTT法检测BM-SCs培养至第3代活性最强;流式细胞仪检测CD29阳性率94.4％、CD34阳性率0.5％及CD90阳性率97％,符合BMSCs的特异性免疫表型的表达;扫描电镜观察证实βME及黄芪甲苷Ⅳ均可诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化,βME组及联合组细胞膜部分损伤;与对照组比较,各诱导组NSE、Nestin、Wnt3a、β-catenin蛋白表达显著升高,Notch-1蛋白表达显著降低(P＜0.05或P＜0.01);Nestin、NSE、Axin、Wnt3a、β-catenin mRNA表达显著升高,Notch-1mRNA表达显著降低(P＜0.01).黄芪甲苷Ⅳ组诱导率高于βME组及联合组.结论:黄芪甲苷Ⅳ通过上调Wnt3a、β-catenin表达及下调Notch-1表达,诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化.