BR3胞外区保守结构域附近刚性区域分析

目的:分析BR3胞外区保守结构域附近刚性区域在BR3结合BAFF过程中的作用.方法:将BR3胞外区分成包含DxL结构域的BR3-1和其C端相邻的BR3-2,构建BR3-1-Fc和BR3-2-Fc重组质粒.将正确的BR3-1-Fc和BR3-2-Fc重组子转入大肠杆菌BL21中,诱导表达,并用蛋白A凝胶亲和层析柱纯化获得相应蛋白.ELISA检测其结合BAFF,BR3-1/2小肽对BR3-1-Fc与BAFF结合活性的影响.结果:表达纯化出纯度高达90％的BR3-1-Fc和BR3-2-Fc融合蛋白.融合蛋白可与BAFF结合,且具有剂量依赖性.BR3-2小肽在高浓度条件下对BR3-1-Fc与BAFF的结合起促进作用,300μg/ml时,促进作用达20％.结论:BR3受体胞外区保守DxL结构域相邻的BR3-2刚性结构区域也可与BAFF结合,在BR3与BAFF的高亲和性能中起作用,为进一步设计高亲和性能BAFF拮抗肽奠定了理论基础.