构建染料显色RT-LAMP方法检测食源性HAV和HEV病毒的研究

目的 构建稳定可靠的染料显色RT-LAMP方法用于食源性HAV和HEV病毒检测. 方法 根据HAV病毒的VP1/VP3衣壳蛋白基因的连接区和HEV病毒的ORF2区的保守序列分别设计和筛选出一套高效、特异的HAV和HEV RT-LAMP引物,结合LAMP扩增过程中中 dNTP反应析出的焦磷酸根离子、锰离子与钙黄绿素之间相互作用进而显色的原理优化和改进RT-LAMP体系.用优化的RT-LAMP体系进行HAV和HEV检测,评价方法的灵敏性和特异性. 结果 通用筛选的引物和优化的HAV、HEV RT-LAMP体系对4份HAV RNA阴性和17份HAVRNA阳性标本进行检测,敏感性100％,特异性100％;用优化的HEV RT-LAMP体系对4份HEV RNA阴性和12份HEV RNA阳性样本进行检测,敏感性100％,特异性100％.两种RT-LAMP体系的扩增结果均不受同属其他亚型病毒干扰.HAV RT-LAMP体系、HEV RT-LAMP体系敏感性好,扩增灵敏度均为10 copies/μl.检测灵敏度与传统Taqman荧光PCR法同功能试剂相近,但耗时减少,结果分析简便. 结论 建立的染料显色RT-LAMP检测食源性HAV和HEV病毒操作简便,检测结果易于分析、可靠,有望用于食源性HAV和HEV病毒临测和调查.