聚乳酸微小凹图式上大鼠海马神经干细胞聚集体形成行为的研究

目的 制备聚乳酸(PLLA)三维微小凹图式并实现图式上新生大鼠海马神经干细胞(NSC)三维聚集体的形成及培养.方法 用2只新生1～3 dSPF级SD大鼠体外分离提取海马组织并培养NSC,观察其悬浮神经球和贴壁生长特性;以紫外光光刻和复制模塑法制备3种不同结构尺寸的PLLA微小凹图式;以普通光学显微镜和ImageJ图像处理软件研究图式上NSC聚集体的形成及大小分布;以免疫细胞荧光技术研究图式上NSC标志物Nestin的表达.结果 NSC在体外能够以悬浮神经球和贴壁生长的2种方式生长.在所研究的3种结构尺寸的图式中,无通道(120-0 μm)和通道宽度为20μm(120-20 μm)的微小凹图式更利于NSC聚集体的形成(P＜0.01);而在通道宽度为40 μm的图式(120-40 μm)上NSC更倾向于沿通道方向生长、迁移,并形成准一维排布的三维神经细胞网络.图式上聚集体Feret's直径分布均匀,无大的聚集体(直径＞ 120 μm)出现.在细胞聚集体及神经细胞网络形成期间NSC均保持Nestin阳性表达.结论 PLLA微小凹图式可用于体外NSC聚集体形成及神经细胞网络的三维图式化,这为干细胞组织工程及基于神经细胞的微系统提供了有效的研究及应用途径.