利用CRISPR/Cas9技术建立SOST荧光报告基因iPSCs细胞系
Journal of Clinical and Experimental Medicine（2020）
摘要
目的 利用CRISPR/Cas9技术构建硬骨素(SOST)基因荧光报告诱导性多能干细胞(iPSCs)细胞株.方法 使用PCR检测iPSCs分化过程不同阶段成骨基因的表达.利用CRISPR/Cas9基因编辑技术将p2A-tdTomato-Neo质粒转染至iPSCs细胞.使用PCR凝胶电泳检测转染的效果,而后分别在光镜下观察成骨不同阶段iPSCs的形态变化、茜素红染色及SOST-tdTomato荧光表达情况,并利用茜素红染色及PCR评估转染细胞的成骨效果及成骨基因表达情况.结果 PCR检测结果 发现,SOST只在骨细胞中稳定表达,可作为骨细胞的标志性基因.利用CRISPR/Cas9技术将tdTomato插入到SOST终止密码子处,转染后的iPSCs细胞株不影响其成骨效果及SOST基因的表达.结论 利用CRISPR/Cas9技术能够成功构建tdTomato-SOST荧光报告基因的iPSCs细胞株.
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