实时荧光定量PCR直接检测粪便标本艰难梭菌tcdB基因

目的 建立艰难梭菌实时荧光定量PCR检测方法,直接检测粪便标本艰难梭菌tcdB基因,并探讨其应用价值.方法 根据艰难梭菌基因组设计tcdB基因特异性引物及探针,用ATCC 43255标准株评价其敏感性,选取艰难梭菌生物学特征相近的临床菌株验证其特异性;收集2015年10-12月临床腹泻患者稀便标本115份,提取基因组总DNA后进行tcdB基因检测,并以产毒培养法为参考方法,探讨该方法的临床诊断价值.结果 荧光定量PCR法最低检测限为1×10-3 ng,并且仅特异性地扩增产毒艰难梭菌;临床样本评价荧光定量PCR的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为75.0％、99.1％、85.7％和98.1％.结论 实时荧光定量PCR直接检测稀便标本中的艰难梭菌tcdB基因可用于艰难梭菌相关腹泻的快速诊断.