阿利吉仑通过调控线粒体介导的凋亡通路改善心肌缺血再灌注损伤

目的 通过体外构建心肌细胞缺氧复氧模型(H/R)模拟体内心肌细胞缺血再灌注,验证阿利吉仑(Aliskiren)对于改善心肌细胞缺血再灌注的药物效果,同时探究细胞凋亡在其中的机制.方法 将细胞实验分为四组:正常氧供应组即对照组(Control)、缺氧复氧组(H/R)、阿利吉仑+缺氧复氧组(阿利吉仑+H/R)、NF-κB P65特异抑制剂+缺氧复氧组(bay 11-7082+ H/R).使用CCK-8检测不同浓度阿利吉仑处理的心肌细胞存活率,ELISA检测各实验组炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)水平.Hoechst33258染色、Annexin V/PI双染流式细胞仪检测各组心肌细胞凋亡比例,JC-1试剂盒测量线粒体膜电位及心肌细胞ATP含量.同时采用Caspase-3试剂盒检测各组心肌细胞凋亡蛋白酶的活性.结果 阿利吉仑小于20 mmol/L时,与心肌细胞活性存在正相关关系,而在20 mmol/L和80 mmol/L之间,两者之间存在负相关关系,文章中阿利吉仑的最佳处理浓度是20mmol/L,此时的心肌细胞活性最高(76.40％±1.64％).相比H/R组,阿利吉仑能降低TNF-α和IL-6水平[(129.33±5.86) ng/L比(319.00±4.58) ng/L,P＜0.05;(29.67±1.53) ng/L比(64.67±2.08) ng/L,P＜0.05],同时显著降低心肌细胞的凋亡率[(7.23％±1.14％)比(32.25％±3.15％),P＜0.05],并具有降低能量代谢障碍心肌细胞所占比例[(6.9％±1.6％)比(13.5％±1.7％),P＜0.05]、稳定线粒体膜电位的功能[(3.90±0.60)比(1.80±0.16),P＜0.05].另外,抑制凋亡蛋白酶Caspase-3的活性[(2.26±0.35)比(3.26±0.62),P＜0.05],且阿利吉仑+H/R组与bay11-7082+H/R组的各项实验结果无统计学差异.结论 阿利吉仑可以通过抑制炎症反应、调控线粒体受体介导的凋亡,改善缺血心肌细胞缺血再灌注损伤,且阿利吉仑的调控凋亡作用可能与NF-κB表达抑制有关.