微小RNA?3677靶向调控SOX6表达及对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

探讨微小RNA?3677(miR?3677)对SRY盒转录因子6(SOX6)表达的靶向调控作用及其对肝癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用癌症多组学和临床数据库LinkedOmics分析TCGA数据库中has?miR?3677表达与肝癌临床病理特征和预后的关系.脂质体法向肝癌细胞SMMC7721转染miR?3677抑制剂(Inhibitor组)和阴性对照(NC组),并以未转染的细胞为空白对照,采用实时荧光定量PCR( QPCR)检测miR?3677水平,MTT法和AnnexinⅤ?FITC／PI双染流式细胞术分别检测增殖和凋亡情况,双荧光素酶报告基因实验验证 miR?3677 对 SOX6 的靶向调控作用,QPCR 和 Western blotting 检测SOX6、B淋巴细胞瘤?2(Bcl?2)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3( caspase?3)水平.结果 miR?3677表达与临床分期和T分期有关,其中miR?3677表达随分期的升高而呈上升趋势(P＜0. 05);预后方面,miR?3677低表达者的总生存期较高表达者延长( P＜0. 05). Inhibitor组的miR?3677水平为0. 374±0. 038,低于空白对照组的1. 039±0. 042和NC组的1. 107±0. 316( P＜0. 05);与空白对照组和NC组相比,Inhibitor 组转染24～48 h 后的细胞增殖活力降低( P＜0. 05);Inhibitor 组的凋亡率为( 11. 241 ± 1. 235)%,高于空白对照组的(3. 578±0. 598)%和NC组的(4. 216±0. 823)%,差异有统计学意义(P＜0. 05). miR?3677模拟物可降低SOX6野生型3’端非翻译区的荧光素酶活性,而对突变型的荧光素酶活性无影响.与空白对照组和 NC 组比较, Inhibitor组SOX6、caspase?3的mRNA和蛋白水平均升高,而Bcl?2的mRNA和蛋白水平降低,差异有统计学意义(P＜0. 05);空白对照组和NC组上述指标的差异均无统计学意义( P＞0. 05).结论 下调miR?3677可抑制SMMC7721细胞的增殖能力并诱导凋亡,可能通过靶向SOX6来发挥促癌作用,有望成为肝癌防治的潜在靶点.