Aβ1-42寡聚体对α-syn过表达SHSY5YA53T细胞自噬功能的影响☆

目的 构建人A53T突变型α-突触核蛋白过表达的SHSY5Y细胞模型,观察Aβ1-42寡聚体对细胞的毒性作用和自噬功能的影响.方法 利用慢病毒稳转方法构建A53T突变型α-突触核蛋白过表达的SHSY5Y细胞及空载体对照细胞,RT-qPCR方法检测SHSY5Y细胞中α-突触核蛋白mRNA的表达.用Aβ1-42寡聚体干预两组细胞24 h,CCK-8法检测Aβ1-42寡聚体对细胞增殖的影响,Western Blot检测细胞自噬相关蛋白的表达水平.结果 慢病毒转染SHSY5Y细胞后,过表达组细胞内α-突触核蛋白表达水平较正常细胞组及开载体对照组增加,差异有统计学意义(P<0.001);人A53T突变型α-突触核蛋白过表达不影响细胞的增殖;不同浓度Aβ1-42寡聚体(0、0.5 μmol/L、1.25 μmol/L、2.5 μmol/L、5 μmol/L、10 μmol/L)处理细胞24 h后,细胞增殖抑制率成浓度依赖性;Aβ1-42寡聚体处理后,α-突触核蛋白过表达组细胞LC3-Ⅱ,Beclin-1自噬蛋白表达水平较对照组细胞显著降低(P<0.05). 结论 人A53T突变型α-突触核蛋白过表达不影响的SHSY5Y细胞增殖,Aβ1-42寡聚体对α-突触核蛋白过表达细胞具有显著毒性,对细胞的损伤机制可能通过抑制细胞自噬功能.