低pH插入肽修饰的载siRNA脂质体的制备与体外评价

目的 核酸类(siRNA等)药物在疾病的治疗上具有高度特异性、安全和靶点多样性等独特优势.但其游离形式在体内容易被核酸酶(RNase)降解、半衰期短、转染效率低,这大大限制了其临床应用.本实验拟设计构建一种微酸环境敏感的脂质体载体,用于实现siRNA(小干扰RNA)的肿瘤组织水平、细胞水平甚至细胞器水平的高效定位递送.方法 采用薄膜分散法,以二油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)和胆甾醇半琥珀酸酯(CHEMS)为膜材制备空白脂质体;用两亲性材料SA-R8压缩siR-NA,再与空白脂质体孵育制备载siRNA脂质体;将端基功能化的磷脂(DSPE-PEG2000-MAL)与低pH插入肽(pHLIP)反应连接,再与载siRNA脂质体孵育融合,构建低pH插入肽修饰的载siRNA脂质体;借助动态光散射原理,流式细胞术和激光共聚焦技术,表征脂质体的粒径及分布,监测细胞摄取、胞内转运与分布特征.结果 制备的载siRNA脂质体平均粒径在150 ～190 nm内;在pH 6.5环境下siRNA的细胞摄取量显著高于pH 7.4环境;并且siRNA能很好地定位在细胞质.结论 该载体显示出了较强的pH敏感性,在微酸环境下可以显著提高siRNA的肿瘤细胞摄取水平.