满天星异荭草苷对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的调控作用机制

目的：研究满天星异荭草苷对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法满天星异荭草苷5，10，20，40，80和160μmol·L-1作用于HepG2细胞24，48和72h后，用MTT法检测细胞存活率。满天星异荭草苷5，10和20μmol·L-1作用细胞48 h，检测细胞内乳酸脱氢酶（LDH）的释放量；作用24 h，荧光探针H2DCF-DA测定细胞内活性氧（ROS）含量，流式细胞仪检测HepG2细胞凋亡和线粒体膜电位，比色法检测胱天蛋白酶3，8和9的活性，RT-PCR检测Bcl-2和Bax mRNA的表达；Western蛋白印迹法检测Bcl-2，Bax和细胞色素c蛋白的表达。结果满天星异荭草苷浓度依赖性地（5~160μmol?L-1）抑制HepG2细胞存活，作用24，48和72 h时IC50分别为62.7±9.1，47.2±11.4和（18.2±7.5）μmol?L-1。与细胞对照组相比，满天星异荭草苷5，10和20μmol?L-1能明显提高LDH水平和细胞凋亡率（P<0.05），10和20μmol?L-1可显著促进ROS的产生，降低线粒体膜电位，并增强胱天蛋白酶3和9的活性；RT-PCR和Western蛋白印迹结果表明，满天星异荭草苷能明显降低Bcl-2 mRNA和蛋白的表达，但升高Bax mRNA和蛋白表达（P<0.05），降低细胞色素c蛋白表达（P<0.05）。结论满天星异荭草苷抑制HepG2细胞增殖，促进其凋亡，该作用与线粒体凋亡途径密切相关。