携带3xflag基因的重组水痘带状疱疹病毒的构建

目的 利用 GalK为基础的同源重组方法,将 3 xflag添加到水痘带状疱疹病毒(varicella-zoster virus ,VZV)开放读码框 7(open reading frame7,ORF7),构建携带3xflag与VZVORF7 融合基因的重组水痘带状疱疹病毒.方法 PCR扩增带有 50 bp VZVORF7 左右同源臂的 GalK及 3xflag基因片段,将所得片段纯化后电转到 VZV细菌人工染色体(SW1 02-VZVWTBAC)感受态细胞,通过同源重组、GalK 筛选及脱 GalK 筛选,获得带有 3 xflag 的 VZVORF7 细菌人工染色体(SW102-VZV ORF7-3xflag-BAC)克隆;将所得克隆进行质粒提取后,转染到 ARPE-19 细胞,观察带有3xflag基因的VZV对ARPE-19 细胞的影响.结果 获得了VZV ORF7 带有3xflag的细菌人工染色体克隆(SW102-VZVORF7-3xflag-BAC).将该质粒转染 AARPE-19 细胞,3 d 后,转染 SW102-VZVWTBAC 及 SW102-VZV ORF7-3 xflag-BAC的细胞可见带有绿色荧光的病毒斑块,Western blot检测结果显示 3 xflag时 ORF7 的表达水平有效增强.结论 获得了携带 3 xflag基因的重组 VZV,表明通过 GalK为基础的同源重组,可方便、快捷并准确地对感兴趣的病毒基因进行操作.