LC-MS/MS法评价CYP 3A酶活性

目的 用高效液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)法测定尿液中氢化可的松和6β-羟基氢化可的松的含量,计算6β-羟基氢化可的松和氢化可的松的比值以反映人体CYP3A酶的活性,为其研究提供有效的分析手段.方法 采用色谱柱:Phenomenex Kinetex C18(1.7μm,50×2.10mm),柱温40℃,以0.1％甲酸水溶液-乙腈为流动相梯度洗脱,流速为0.5mL· min-1,以醋酸氟氢化可的松为内标.质谱采用大气压离子源,以多反应离子监测模式进行定量分析,尿液样品用pH=5缓冲液和乙酸乙酯进行液-液萃取.结果 氢化可的松在0.5～200ng· mL-1浓度范围线性关系良好;6β-羟基氢化可的松在10～1250ng·mL-1浓度范围线性关系良好.日内、日间RSD均小于11％(n=6),提取回收率＞65％.结论 本文建立的方法操作简单、灵敏度高、分析时间短,适合于人体尿样中氢化可的松和6β-羟基氢化可的松的含量测定及人体CYP3A酶的活性评价.