人全长Notch1基因的克隆及其在HEK293 T细胞中的表达

Yanqing LIN,Xiaomei QIU,Jianbin YE,Bingxin HU,Yan LI,Yunshan NING

Journal of Jinan University（Natural Science & Medicine Edition）（2017）

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摘要

目的:克隆人全长Notch1基因,构建人全长Notch1/pCMV6-Entry真核重组质粒并在HEK293 T细胞中进行瞬时表达.方法:采用PCR公知不认方法扩增人全长Notch1基因并克隆到真核表达载体pCMV6-Entry中并用限制性内切酶分析和DNA测序鉴定重组质粒.将该重组质粒转染HEK293 T细胞24h后,通过实时荧光定量PCR(q-PCR)和Western blot检测鉴定人全长Notch1的表达.结果:成功构建了人Notch1/pCMV6-Entry重组真核表达质粒,人全长Notch1基因在mRNA和蛋白水平上的表达显著高于pCMV6-Entry载体对照组和HEK293 T细胞对照组.结论:克隆获得人全长Notch1基因并验证在HEK293 T细胞中表达.

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关键词

Notch1 signaling pathway,eukaryotic expression,Notch1,pCMV6-Entry

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