绿色荧光蛋白基因与hERG基因G604S突变共表达功能研究

目的 观察增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因与hERG(human ether-a-go-go-related gene)基因融合后是否影响hERG通道的电生理特性. 方法 HEK293细胞分别被转入pcDNA3-WT-hERG和/或pcDNA3-G604S-hERG,pEGFP-WT-hERG和/或pEGFP-G604S-hERG.激光共聚焦观察hERG通道蛋白在细胞内的表达定位;膜片钳实验记录hERG电流. 结果 在转染pcDNA3-WT-hERG或pEGFP-WT-hERG的细胞中,hERG蛋白表达于胞质与胞膜;在转染pcDNA3-G604S-hERG或pEGFP-G604S-hERG的细胞中,hERG蛋白仅在胞质表达.HEK293细胞转染pcDNA3-WT-hERG后,hERG电流的最大尾电流密度为(75.4±2.2) pA/pF,明显高于转染pEGFP-WT-hERG的最大尾电流密度[(15.1±0.7)pA/pF,P＜0.05].共转染pcDNA3-WT-hERG与pcDNA3-G604S-hERG的最大hERG尾电流密度明显高于pEGFP-WT-hERG/pEGFP-G604S-hERG的最大hERG尾电流密度[(23.1±0.8)pA/pF vs(12.6±0.9) pA/pF,P＜0.05].此外,EGFP基因与野生型或突变hERG基因融合后,明显改变了hERG通道的电压依赖性激活及去失活特性. 结论 EGFP基因与野生型或突变hERG基因融合不影响hERG通道蛋白在细胞内的表达定位,但明显改变了hERG电流的大小、激活及去失活特性,因此检测突变hERG通道的电生理功能时应避免使用绿色荧光蛋白基因质粒作为表达载体.