慢性粒细胞白血病 BCR -ABL融合基因实时定量检测平台的建立

目的：建立慢性粒细胞白血病（chronic myelogenous leukemia ，CML）患者BCR-ABL融合基因检测及微小残留病变实时定量监测的诊断平台。方法依据GenBank中编码P210蛋白的融合基因M（ b2a2，b3a3）及ABL的基因序列，分别设计引物及Taqman探针，以BCR-ABL阳性的CML患者cDNA为模板，通过PCR扩增出587 bp的基因片段，连入pMD 18-T载体，制备成标准品并绘制标准曲线，运用实时荧光定量PCR（ real-time quantitative PCR，RQ-PCR）技术监测BCR-ABL转录水平的变化。结果成功构建BCR-ABL标准品。应用RQ-PCR探针法，以ABL为内参，对CML患者进行BCR-ABL融合基因的检测，得到比较稳定的定量数据，与定性结果一致。结论自行构建BCR-ABL质粒为标准品，运用RQ-PCR实时监测BCR-ABL融合基因的表达变化，敏感性好，稳定性高，对临床检验具有普遍意义。