NLRC5调节转化生长因子-β1诱导的肝星状细胞活化及逆转对肝纤维化的影响

背景 肝纤维化是多种慢性肝病的共同病理改变.在肝纤维化过程中,转化生长因子-β1(TGF-β1)高度表达,诱导肝星状细胞(HSC)活化并促进纤维化的进展.NLRC5作为最主要的核苷酸结合寡聚化结构域NOD样受体(NLRs)家族成员,是炎症途径中的重要负性调节因子.有证据表明,NLRC5是肝纤维化及其逆转的关键调节因子,可以通过调节炎症信号和肝纤维化反应参与肝纤维化的发展及逆转.目的 探讨NLRC5在TGF-β1诱导的HSC活化及逆转中的作用,并分析其与肝纤维化的关系.方法 2018年3—7月选取24只8周龄雄性C57BL/6小鼠(体质量15～20 g),根据随机数字表法分为实验组、正常对照组和逆转组,每组8只.实验组和逆转组建立肝纤维化模型,然后处死小鼠,进行HE、Masson染色和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫组化,观察各组肝纤维化程度;检测小鼠肝组织NLRC5及其mRNA、磷酸化抑制蛋白α IκBα(P-IκBα)、IκBα、胞质p65、核p65水平.体外培养LX-2细胞,将培养的细胞分为对照组、TGF-β1组及TGF-β1+MDI组;检测各组LX-2细胞中α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原α1(Col1α1)及其mRNA水平,NLRC5及其mRNA水平.siRNA干扰NLRC5后,将激活的LX-2细胞分为NLRC5-siRNA组、Control-siRNA组及正常细胞组,检测NLRC5及其mRNA、α-SMA、Col1α1、P-IκBα、IκBα、胞质p65、核p65.结果 HE染色结果显示正常对照组肝细胞索排列整齐,无坏死变性、炎性细胞浸润现象;实验组小鼠肝组织存在点状坏死和再生现象,可见脂肪变性、气球样变性;逆转组可见肝脏恢复红润,结构趋于正常.Masson染色结果显示与正常对照组相比,实验组小鼠镜下可见大量蓝色胶原纤维;而逆转组胶原纤维增生相比实验组有一定程度的改善.实验组小鼠肝组织中α-SMA阳性细胞比例高于正常对照组和逆转组(P<0.05).实验组小鼠肝组织中NLRC5、NLRC5 mRNA水平高于正常对照组、逆转组(P<0.05).实验组小鼠肝组织P-IκBα、核p65水平高于正常对照组及逆转组,胞质p65水平低于正常对照组及逆转组(P<0.05).TGF-β1组LX-2细胞的α-SMA、Col1α1及其mRNA水平均高于对照组、TGF-β1+MDI组(P<0.05).TGF-β1组LX-2细胞中NLRC5及其mRNA水平高于对照组、TGF-β1+MDI组(P<0.05).NLRC5-siRNA组NLRC5水平(0.679±0.045)低于Control-siRNA组(1.260±0.071)(P<0.001).NLRC5-siRNA组α-SMA、Col1α1及其mRNA水平低于Control-siRNA组,高于正常细胞组(P<0.05).NLRC5-siRNA组P-IκBα和核p65水平高于正常细胞组和Control-siRNA组,胞质p65水平低于正常细胞组和Control-siRNA组(P<0.05).结论 NLRC5可调节TGF-β1诱导的HSC活化和细胞外基质(ECM)合成,并可以调节和干扰与肝纤维化相关的关键过程,其可能通过核因子(NF)-κB信号通路在调节肝纤维化进展及逆转中起关键作用.