共培养体系间充质干细胞对同源内皮祖细胞增殖和血管形成的影响

目的：临床干细胞治疗心肌梗死可能归因于细胞旁分泌对细胞存活和血管形成的作用，文中探讨小鼠骨髓来源的间充质干细胞（ mesenchymal stem cells ， MSCs ）在非接触共培养体系中对同源内皮祖细胞（ endothelial progenitor cells ， EPCs）增殖和血管形成的影响。方法小鼠骨髓细胞经差速贴壁法分离MSCs 与EPCs，以流式细胞术（ flow cytometry， FCM）检测MSCs和EPCs表面标记物，以成骨成脂成软骨诱导分化对MSCs进行功能鉴定，以成血管对 EPCs进行功能鉴定。取第3代MSCs和EPCs，按1∶1的细胞比例接种入Transwell共培养系统中，以下室接种EPCs上室接种MSCs为实验组，同时设置相同密度单纯EPCs接种于下室为对照组。采用MTT比色法和EdU荧光标记法检测MSCs对EPCs增殖能力的影响，采用计数血管样结构数目和联结点数目检测MSCs对 EPCs血管形成能力的影响。结果第3代MSCs经FCM检测高表达Sca-1，CD29低表达CD45，CD11b；经诱导可向成骨成软骨成脂方向分化。第3代EPCs经FCM检测高表达CD34、CD133和VEGFR2，在基质胶上可形成血管样结构。 MTT比色法和EdU荧光标记法结果显示与对照组相比，实验组细胞的增殖能力在72 h后显著增强（P＜0．05）；实验组DNA合成期的细胞比例较对照组显著增多[（89．00±5．30） vs （76．00±3．38）， P＜0．01）]。倒置显微镜观察结果显示实验组EPCs 生成的血管样结构和联结点数目较对照组明显增加[（13．53±2．33） vs （10．80±1．82）、（16．60±2．23） vs （13．07±2．81）， P＜0．05]。结论利用差速贴壁法可同时分离纯化扩增MSCs 和EPCs。 EPCs在和MSCs非接触共培养时其增殖能力和血管形成能力都得到提高。