高表达重组人组织激肽释放酶7基因的前列腺癌单克隆细胞株的构建

目的：建立稳定高表达重组人组织激肽释放酶7基因（ KLK7）的前列腺癌细胞株DU145，为前列腺癌发生机制的研究奠定基础。方法 PCR法扩增KLK7 cDNA，并克隆到真核表达载体pcDNA3．1上；经过限制性内切酶酶切、DNA测序验证正确后，以脂质体法转染人前列腺癌DU145细胞；通过G418筛选，每个单克隆细胞扩大培养，建立稳定转染KLK7的DU145单克隆细胞株。采用Western blot 法检测DU145细胞株KLK7表达。结果酶切鉴定及DNA 测序分析显示 pcDNA3．1-KLK7真核表达载体成功构建；转染后，成功获得稳定高表达KLK7的DU145单克隆细胞株。 Western blot 结果显示，pcDNA3．1-KLK7转染的DU145细胞KLK7表达量明显高于转染空载体组细胞（P＜0．01）。结论 pcDNA3．1-KLK7真核表达载体的建立及稳定高表达KLK7的前列腺癌单克隆细胞株的建立，为研究KLK7在前列腺癌发生发展中的作用提供了条件。