小鼠髓源性内皮祖细胞体外培养的两种不同分离方法的比较

目的 比较密度梯度离心和红细胞裂解法分离体外培养小鼠髓源性内皮祖细胞(BM-EPCs)的优缺点.方法 选用4周龄的C57BL/6小鼠,密度梯度离心和红细胞裂解法分离小鼠骨髓细胞,进行细胞计数、检测细胞活率,差速贴壁纯化BM-EPCs,定期镜下观察细胞的形态.培养7 d后,流式细胞仪检测细胞表面CD34、血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR-2)、CD31的表达;1,1'-二十八烷基-3,3,3',3'-四甲基吲哚羰花青标记的乙酰化低密度脂蛋白(DiL-acLDL)摄取和异硫氰酸荧光素标记荆豆凝集素1(FITC-UEA-1)结合能力经双染后激光共聚焦显微镜拍照进行检测;培养14 d进行免疫荧光检测CD31的表达.结果 密度梯度离心和红细胞裂解法提取两种方法均能分离BM-EPCs进行体外培养,与密度梯度离心方法比较,红细胞裂解法操作更为简便,获得的细胞数量较多[(1.90 ±0.55)×107比(0.72 ±0.42)×107](P <0.05),细胞存活率较高[(95.25 ±1.03)%比(83.75 ± 1.93)%](P<0.01),细胞表面CD34、VEGFR-2表达、Dil-acLDL和FITC-UEA-1双染阳性的细胞比例低于密度梯度离心分离法[(30.03 ±2.40)%比(46.93 ±2.89)%,(28.70 ±6.51)%比(43.97 ±1.39)%,(78.30 ±4.27)%比(89.20 ±2.65)%],培养14 d后的CD31阳性细胞比例低于密度梯度离心分离法[(84.10 ±3.86)%比(93.57 ± 4.27)](P<0.05).结论 两种分离方法均能分离BM-EPCs进行体外培养,提取方法各有利弊,可结合研究方案进行选择.