miR-199a在LPS诱导的大鼠原代心肌细胞中通过激活NF-κB信号通路加重心肌细胞损伤

目的 探究miR-199a在LPS诱导的大鼠原代心肌细胞中的作用.方法 将大鼠原代心肌细胞分为对照组(NC)、LPS组、LPS+miR-199a mimic组、LPS+miR-199a inhibitor组.本实验采取CCK8方法探究miR-199a对于大鼠原代心肌的细胞活力影响.随后运用ELISA法检测miR-199a对于LPS诱导大鼠原代心肌细胞的炎症因子如TNF-α及IL-1β的释放情况.通过流式细胞仪检测miR-199a对于LPS诱导大鼠原代心肌细胞的凋亡蛋白变化.运用Western blot实验研究miR-199a模拟物或抑制剂的miR-199a表达情况以及研究miR-199a对于LPS诱导大鼠原代心肌细胞的p-p65、p65和p-iκBa、iκBa及凋亡蛋白表达情况.结果 CCK8法发现与NC组相比,LPS抑制了大鼠原代心肌细胞的活力(P<0.01),然而经模拟物处理后,经LPS诱导的大鼠原代心肌活力受抑制更加严重(P<0.05).同时,与模拟物组相比,miR-199a抑制剂组大鼠原代心肌细胞活力受抑制降低(P<0.01).ELISA结果表明,与NC组相比,LPS诱导了TNF-α及IL-1β的释放(P<0.05).与LPS组相比,miR-199a模拟物组加重了TNF-α(P<0.01)及IL-1β(P<0.05)的释放,而miR-199a抑制剂组TNF-α(P<0.01)及IL-1β(P<0.05)的释放减少.流式凋亡、Western blot结果表明,50 nmol/L的miR-199a模拟物可通过上调caspase3、bax表达和下调bcl2表达而加剧LPS引起的大鼠原代心肌细胞的凋亡(P<0.05).进一步检测NF-κΒ通路发现LPS可通过p-iκBa与p-p65表达的上调诱激活大鼠原代心肌细胞NF-κΒ通路,但与LPS组相比,在模拟物处理后,p-p65和p-iκBa上调更加明显.与此同时,阻断miR-199a后,与模拟物组相比,p-p65和p-iκBa表达下调.这些发现表明用模拟物处理可以加重体内LPS诱导的心肌炎中NF-κB信号传导途径的激活.进一步使用NF-κB通路抑制剂发现,miR-199a模拟物并不能加剧LPS对于大鼠原代心肌细胞的活力抑制,这进一步提示miR-199a可能通过NF-κB通路加剧心肌细胞的损伤.结论 miR-199a可加重心肌细胞的损伤,这种损伤主要通过NF-κB信号通路来实现的.