禽源H9N2亚型猪流感病毒反向遗传操作技术平台的建立

Xiao-min LIU,Qi WANG,Hai-ming YANG,Xiao-qian GONG,Bao-yang RUAN,Peng ZHANG, Tong-ling SHAN, Wu TONG,Guang-zhi TONG,Hai YU

Chinese Journal of Veterinary Parasitology（2017）

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摘要
利用RT-PCR技术扩增了禽源H9N2亚型猪流感病毒A/Swine/Guangxi/7/2007(H9N2)的8个目的基因片段,分别克隆至pBD双向转录表达载体.将8个重组质粒纯化后共转染293T细胞,54 h后收集上清,接种MDCK细胞.当拯救的病毒在MDCK细胞上增殖至第3代时,收集的细胞上清经检测具有血凝效价.经过测序分析,确定获救病毒的8个基因片段序列与野生株完全一致,表明病毒拯救成功.禽源H9N2亚型猪流感病毒反向遗传操作技术平台的成功建立为探索猪流感病毒致病机理、传播机制与基因功能研究奠定了基础.
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关键词
Swine influenza virus,H9N2,RT-PCR,virus rescue,reverse genetics system
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