Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒一步法二重RT-PCR检测方法的建立

为了建立一种能同时检测Ⅰ型鸭肝炎病毒(duck hepatitis virus type Ⅰ,DHV-Ⅰ)和鸭瘟病毒(duck plague virus,DPV)的检测方法,根据GenBank中DHV-Ⅰ和DPV的基因保守序列,设计合成两对特异性引物,扩增得到DHV-Ⅰ和DPV片段,大小分别为399 bp和232 bp.据此建立了双重PCR检测方法,并将反应条件进行了优化.结果显示,该方法特异性强,能同时扩增出DHV-Ⅰ和DPV目的条带,而对其他常见的水禽病痛原的扩增结果均为阴性.该方法灵敏度高,最低能检出5.3 pg Ⅰ型鸭肝炎病毒和2.7 pg鸭瘟病毒的RNA或DNA.采用该方法对在江苏省徐州地区所采集的166份鸭肛拭子进行检测,DHV-Ⅰ阳性率为1.2％;DPV阳性率为26％.同时,利用该方法对建立的DHV-Ⅰ和DPV雏鸭感染模型的肝组织和肝组织接种的鸭胚尿囊液进行检测,结果均为阳性,与常规PCR和RT-PCR检测结果一致.上述结果表明.本研究建立的一步法二重RT-PCR方法可以用于DHV-Ⅰ和DPV快速准确的诊断.