犬α干扰素真核表达条件优化纯化及活性研究

为了对高效表达犬α干扰素的毕赤酵母重组菌株进行表达条件的优化,对表达后的目的蛋白进行纯化及活性研究,研究通过单因素试验方法对影响犬α干扰素的真核表达摇瓶培养条件进行了优化,利用Phenyl Sphareose High Performance疏水层析介质,Q Sepharose High performance强阴离子交换层析介质对表达后目的蛋白进行纯化,期间采用SephadexTM G-25 Fine介质脱盐,采用MDCK-VSV微量病变抑制法对纯化后蛋白的活性进行检测.结果表明:得出最佳的诱导表达条件为诱导温度28℃,诱导时间72 h,诱导pH值6.0,诱导甲醇浓度1.0％;优化后目的蛋白表达量达到0.18 mg/mL,比优化前提高了54％;纯化后获得纯度达90％以上的目的蛋白,测得目的蛋白的比活为1.08×l08 U/mg.说明摇瓶优化可显著提高目的蛋白的表达量,毕赤酵母重组菌株能够获得较高具有较高活性的目的蛋白,可用于犬α干扰素的大规模生产及临床应用.