丁香假单胞大豆致病变种不同HrpZ蛋白差异区域功能研究

[目的]丁香假单胞大豆致病变种(Pseudomonas syringae pv.glycinea)A1和S1菌株编码产生的HrpZ蛋白差异序列主要集中在C端的3个区域,并且这2个蛋白诱导非寄主HR的能力也存在差异.本研究将探究HrpZ蛋白这3个差异区域在烟草上诱导HR(hypersensitive response)和抑制烟草花叶病毒(TMV)中所起的作用.[方法]采用常规PCR及重叠PCR方法将这2个hrpZ基因的3个差异区域分别进行互换,构建了相应的重组表达载体,表达并纯化得到了6个重组蛋白,相对分子质量均在41× 103左右.并检测了其诱导HR活性、诱导植物抗病性.[结果]检测结果表明:重组蛋白HrpZS(S2→A2)和HrpZA(A3→S31)诱导HR的能力相比亲本都有所增强,6个重组蛋白诱导烟草抗TMV的活性都明显强于亲本,其中,HrpZA(A3→S3)和HrpZS(S3-→A3)的活性最强.[结论]此试验表明HrpZ蛋白的这些差异区域(第7、8、9个α-螺旋)是过敏反应能力的主要调控区域,同时C-端第8、9个α-螺旋区域与诱导植物抗病性也显著相关.本研究为改造HrpZ类harpin蛋白激发子,提高其诱导抗性及功能域研究提供了理论依据.