哈密瓜果实转录因子CmCBF1的克隆及表达分析

[目的]研究CBF在哈密瓜果实采后抗冷过程中的调控功能,对转录因子CmCBF1进行克隆与表达分析,为进一步研究哈密瓜果实低温贮藏过程中的冷害发生机制提供理论依据.[方法]以新密3号采后离体果实为试材,根据已报道的甜瓜CBF1预测序列(XM_ 008440940),与基因组甜瓜组(https://melonomics.net)进行BLAST比对,确定基因编码区起始和终止位置,针对CBF1编码区设计特异性引物,通过对果实cDNA进行扩增,获得CBF1全长序列,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析其在不同温度条件下的表达特性.[结果]克隆获得哈密瓜果实转录因子CBF1,命名为CmCBF1,该基因序列为639 bp(GenBank登录号为KT737742),编码212个氨基酸,蛋白质分子量为23.89 kDa,等电点为5.23;同源性分析表明,哈密瓜果实转录因子CmCBF1与草莓FaCBF1亲缘关系较近,达到85％.qRT-PCR分析结果显示,哈密瓜果实转录因子CmCBF1在1、3及5℃低温诱导条件下特异性表达,在20℃室温条件下几乎不表达.[结论]转录因子CmCBF1的表达与哈密瓜果实采后冷害发生负相关(r=-0.663).