黑线鳕鱼皮胶原蛋白胰蛋白酶酶解多肽对UVB诱导HaCaT光损伤的抑制作用

目的:研究黑线鳕鱼(Melanogrammus aeglefinus)皮胶原蛋白胰蛋白酶酶解多肽的抗氧化、抑制光损伤作用,提高鱼皮的再利用价值.方法:利用单因素试验和响应面试验设计,探讨黑线鳕鱼皮胶原蛋白的最佳酶解工艺.将制得的酶解多肽通过基质辅助激光解离飞行时间串联质谱仪(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight tandem mass spectrometry,MALDI-TOF MS/MS)测定多肽序列.利用Discovery Studio中CDOCKER模块将所得的优势肽与抗氧化相关的Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)进行分子对接.用不同质量浓度的多肽预处理人表皮角质形成细胞(HaCaT)后,使用中波紫外线诱导HaCaT细胞构建光损伤模型,通过超氧化歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及细胞凋亡与周期来研究酶解多肽抑制光损伤的能力.结果:黑线鳕鱼皮胶原蛋白在胰蛋白酶质量分数1.23%、酶解温度52.95?℃、酶解时间1.75?h条件下,水解度为78.33%.MALDI-TOF MS/MS测定出酶解液中的优势肽序列为V-IFFVTMGTP-R、L-SIVPV-R和L-MHT-T.通过分子对接发现V-IFFVTMGTP-R与Keap1结合最稳定,从而预测其具有抗氧化的作用.用250?mg/mL酶解液处理光损伤的HaCaT细胞,其SOD、GSH-Px活性较模型组极显著提高(P＜0.01),MDA含量极显著降低(P＜0.01).结论:黑线鳕鱼皮胶原蛋白胰蛋白酶酶解多肽具有抗氧化活性,对光损伤具有一定的抑制作用.