葡萄球菌耐药基因aph的LAMP检测方法研究
Modern Food Science & Technology（2015）
摘要
随着抗生素大量而广泛的使用,细菌的耐药性已成为世界范围内关注的问题,对细菌携带耐药基因的检测已成为生物安全调查评估的新途径.本实验应用PCR方法扩增新霉素耐药基因aph,将其克隆于pEASY-T1载体并测序.通过Genbank同源性比较,在aph基因保守区设计了一套环介导等温扩增(LAMP)特异性引物,通过对LAMP反应体系和反应条件的优化,建立了耐新霉素aph基因的LAMP检测方法,其最佳工作条件为:甜菜碱浓度为0.8 mol/L,Mg2+浓度为20 mmol/L,反应温度63℃,时间50 min.此方法可在60 min左右完成对aph基因的检测,特异性好.应用系列稀释的aph基因质粒进行敏感性检测比较,结果表明aph基因的LAMP检测灵敏度与PCR相当,检测限约20个拷贝.对38株葡萄球菌分离株的aph基因的LAMP检测表明,aph基因阳性携带率为84.2％.
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