A20在小鼠急性病毒性心肌炎中保护作用及其机制研究

目的 探究抗炎蛋白TNFAIP3(TNF-α induced protein 3)(A20)在急性病毒性心肌炎发生发展过程中保护作用.方法 90只6-8周龄Balb/c小鼠分为6组:Con组,GFP组,A20组,CVB3组,CVB3+GFP组,CVB3+A20组,每组15只.包装rAAV9-GFP与rAAV9-A20病毒,纯化后经尾静脉注射过表达相应基因,2周后腹腔注射100ul含106 PFU CVB3病毒液或PBS.监测各组小鼠体重变化及小鼠存活情况,病毒注射后第10天行心脏超声及心导管检查,取心脏,行HE染色和免疫组化检测(CD68及Ly6G).RT-PCR检测心脏炎症因子TNF-α,IL-1 β,IL-12,IL-17A,IL-10,IL-13 mRNA水平.TUNEL检测小鼠心脏凋亡.收集小鼠血浆,检测血浆磷酸肌酸激酶CK-MB和肌钙蛋白cTnI.Western blot检测炎症、凋亡相关蛋白.结果 CVB3诱导Balb/c小鼠急性病毒性心肌炎形成,CVB3组和CVB3+GFP组小鼠体重增长缓慢,第4天开始出现死亡,第10天达到高峰,累积生存率分别为40％和46.7％.HE染色可见大量炎症细胞浸润,心肌细胞坏死.免疫组化显示巨噬细胞及中性粒细胞浸润显著.TUNEL显示大量心肌细胞凋亡.与正常Con相比,心脏超声和心导管显示CVB3组EF、FS、dp/dtmax、-dp/dtmin显著降低,心脏收缩功能下降.小鼠促炎因子TNF-α,IL-1β,IL-12,IL-17AmRNA水平显著增高,抑炎因子IL-10,IL-13 mRNA降低.血浆游离CK-MB和肌钙蛋白cTnI,高于正常组.Western blot示炎症、凋亡相关蛋白激活.高表达A20后,炎症细胞浸润减少,心肌细胞凋亡缓解,炎症通路及凋亡均抑制.促炎因子表达水平降低,血浆肌钙蛋白减少.结论 A20可缓解CVB3诱导的急性病毒性心肌炎病理生理学改变,从而发挥保护作用.