靶向柯萨奇病毒B3 siRNA的设计与筛选

目的 针对柯萨奇病毒B3(CVB3)基因筛选抑制效率较高的siRNA新序列,同时探究顺式作用复制元件(CRE)以外的2C区是否是设计siRNA序列的有效靶点.方法 在CVB3的基因组中以3D、3C、2C、2A、VP3、VP2和VP1区为靶点设计新的siRNA序列,在HeLa细胞中转染siRNA序列,转染12h后,进行CVB3感染.感染病毒36h后收毒,用TCID50、MTT、Western blot和real-time RT-PCR 4种方法从不同水平上检测本研究设计筛选的siRNA序列在CVB3复制方面的抑制效果.结果 设计的siRNA序列共11条,其中5条对CVB3的复制在细胞的死亡率、病毒的相关致病性、RNA分子水平和蛋白表达水平4个方面均表现出了较好抑制效果.其中siRNA-5对CVB3复制的抑制率达到了84％,本序列是针对2C区CRE以外的部分设计的.结论 本文发现了5条新的抑制率较高的siRNA靶序列,同时首次证明CRE以外2C区也是设计siRNA序列的有效靶点.