干扰素诱导的双链RNA依赖性蛋白激酶体外抗乙型肝炎病毒活性的研究
Chinese Pharmacological Bulletin（2015）
摘要
目的构建表达双链RNA依赖性蛋白激酶（PKR）融合绿色增强荧光蛋白（p EGFP-PKR）真核表达质粒,并进一步研究PKR蛋白在体外抗乙型肝炎病毒（HBV）活性。方法以p EGFP-N1为空载体,运用分子克隆技术构建重组质粒p EGFP-PKR,通过双酶切和直接测序两种方法验证重组质粒p EGFP-PKR是否构建成功。以能分泌完整HBV病毒颗粒子的肝胚瘤细胞株Hep G2.2.15细胞为细胞模型,采用重组质粒转染方式处理Hep G2.2.15细胞,运用荧光显微镜观察融合蛋白p EGFP-PKR在细胞内的表达,以电化学发光方法和实时荧光定量PCR技术分析细胞上清HBV抗原表达和细胞病毒复制水平。结果酶切鉴定和序列分析证实成功构建重组质粒p EGFP-PKR,转染Hep G2.2.15细胞后在荧光显微镜下可见融合蛋白p EGFP-PKR表达,同时细胞分泌的HBV抗原与空载体组相比较明显下降（P<0.05）,而细胞外HBV复制水平未见明显变化。结论在体外肝细胞模型中,PKR蛋白具有一定的抗HBV活性作用。
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关键词
hepatitis B virus,plasmid,PKR protein,antigen,complication,cells
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