Desmuslin基因过表达对曲张静脉源性平滑肌细胞增殖及迁移功能的影响

目的 通过Desmuslin (DMN)重组逆转录病毒表达载体感染曲张大隐静脉源性平滑肌细胞(SMCs),观察上调DMN的表达后对SMCs功能的影响,探讨DMN与下肢静脉曲张发生发展的关系.方法 贴块法行曲张静脉源性SMCs原代培养,免疫荧光细胞化学法鉴定SMCs的纯度;分别运用已制备好平均滴度为(2.80±1.46)×106 cfu/ml的pRetroQ-AcGFP1-C1-DMN重组逆转录病毒与pRetroQ-AcGFP1-C1空载逆转录病毒感染SMCs;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及Western blot检测转染效率;细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测比较SMCs的增殖活性;Transwell技术检测SMCs的迁移活性.结果 免疫荧光细胞化学法显示特异性的平滑肌α-肌动蛋白(α-actin)染色阳性的细胞数占总细胞数的99％以上;DMN过表达组的DMN mRNA水平为空载组的(8.3±1.1)×104倍(P＜0.01),DMN蛋白表达为空载组的(4.5±1.2)倍(P＜0.01);DMN过表达组SMCs增殖活性为空载组的(48.2±4.5)％(P＜0.01);DMN过表达组细胞的迁移活性为空载组的(44.3±4.7)％(P＜0.01).结论 在曲张静脉源性SMCs中上调DMN的表达后显著抑制SMCs的增殖及迁移活性,DMN蛋白可能在下肢静脉曲张的发生发展中起着重要作用.