雷帕霉素对甲氨蝶呤诱导急性淋巴细胞白血病EU-4细胞凋亡的影响

目的 探讨雷帕霉素(RAPA)对甲氨蝶呤(MTX)诱导急性淋巴细胞白血病(ALL) EU-4细胞凋亡的影响.方法 分别使用5μg/L、10 μg/L、25 μg/L、50 μg/L和100 μg/L的RAPA预处理EU-4细胞0.5h,RAPA未处理组作为对照组,收集细胞,Western blot检测LC-3蛋白,流式细胞技术检测凋亡率.观察不同质量浓度的RAPA预处理对EU-4细胞自噬和凋亡的影响,确定RAPA预处理浓度.将EU-4细胞分为RAPA预处理组和未处理组,分别使用0.05.μmol/L、0.10 μmol/L和0.20 μmol/L的MTX作用24h,流式细胞技术检测凋亡率,Western blot检测LC-3蛋白,酶标仪测定吸光度(A562),根据标准曲线计算样品的蛋白浓度.结果 检测对照组和不同浓度RAPA预处理组的EU-4细胞凋亡率显示,对照组,5μ/L、10 μg/L、25 μg/L、50 μg/L和100μg/L RAPA预处理组EU-4细胞的凋亡率分别为(7.51±0.32)％、(7.33±0.41)％、(7.71±0.51)％、(7.63±0.38)％、(7.80±0.43)％和(16.66 ±0.87)％,5μg/L、10 μg/L、25μg/L和50μg/L RAPA预处理组EU-4细胞的凋亡率与对照组比较差异均无统计学意义(t=0.427、-0.417、-0.297、-3.561,均P＞0.05),而100μg/L RAPA预处理组EU-4细胞的凋亡率显著高于对照组,差异有统计学意义(t=-28.815,P＜0.01).根据Western blot和流式细胞技术的检测结果综合考虑,选取50μg/L作为RAPA预处理的浓度.流式细胞技术检测RAPA预处理组和未处理组MTX作用24h后EU-4细胞的凋亡率显示,RAPA预处理组用0.05 μmol/L、0.10 μmol/L和0.20 μmol/L MTX作用24h后,EU-4细胞的凋亡率分别为(50.23±2.11)％、(66.88±2.89)％和(73.11±2.67)％,未处理组0.05 μmol/L、0.10 μmol/L和0.20 μmol/L MTX作用24 h后,EU-4细胞的凋亡率分别为(22.53±1.67)％、(42.82±2.26)％和(53.22±1.93)％.相同浓度的MTX作用24h后,RAPA预处理组EU-4细胞的凋亡率均显著高于未处理组,差异均有统计学意义(t=12.693、66.148、14.429,均P＜0.01).结论 RAPA预处理后,较低剂量的MTX即可诱导急性淋巴细胞白血病EU-4细胞大量凋亡.