金属硫蛋白1H在儿童和青少年骨肉瘤血清中的表达及其对细胞增殖的影响

目的 检测金属硫蛋白1 H(MT1H)在儿童和青少年骨肉瘤血清中的表达,分析MT1H与临床病理特征的关系,并探讨MT1H对人骨肉瘤细胞U2OS增殖能力的影响及其机制.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测MT1 H在儿童和青少年骨肉瘤和骨良性疾病中表达情况,分析MT1H表达和骨肉瘤临床病理特征之间的关系.在体外将MT1H基因转染人骨肉瘤细胞U2OS,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Wes-tern blot方法检测MT1 H mRNA和蛋白的表达情况,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,采用Western blot方法检测核因子(NF)-κB、抑制性 κB(IκB)-α蛋白表达情况.结果 MT1H在骨良性疾病和骨肉瘤血清中的表达水平分别为(0.51±0.52)μg/L和(2.17±0.78)μg/L,其在骨肉瘤血清中的表达水平明显升高(t=-8.966,P<0.05).MT1 H在Ⅰ~ⅡA期、ⅡB~Ⅲ期骨肉瘤血清中的表达水平分别为(1.98±0.69)μg/L、(2.45±0.82)μg/L,其表达水平呈逐渐升高趋势,差异有统计学意义(t=-2.343,P<0.05).转染MT1H基因后,骨肉瘤细胞MT1H mRNA和蛋白表达均升高(均P<0.05).MTT结果显示,与空白对照组、空质粒转染组相比,MT1H真核质粒转染骨肉瘤细胞系U2OS 72 h后,细胞增殖加快.空白对照组、空质粒转染组、MT1H转染组A值分别为0.38±0.03、0.36±0.03、0.42±0.03;与空白对照组、空质粒转染组相比,MT1H转染组A值升高(F=4.213,P<0.05).Western blot检测显示,空白对照组、空质粒转染组、MT1H转染组细胞中NF-κB的相对表达量分为0.56±0.05、0.53±0.05、0.92±0.07,IκB-α蛋白的相对表达量分别为0.64±0.06、0.62±0.09、0.34±0.08,与空白对照组、空质粒转染组相比,MT1 H转染组NF-κB蛋白表达上调、IκB-α蛋白表达下调(F=44.581、14.927,均P<0.05).结论 MT1H在儿童和青少年骨肉瘤血清中表达升高,并且分期越晚,表达越高,体外可能通过增强NF-κB信号通路,促进细胞增殖.