干扰谷氨酰胺酶1表达对人胃肠道神经内分泌肿瘤细胞生物学特性的影响

目的 观察干扰谷氨酰胺酶1(GLS1)表达对人胃肠道神经内分泌肿瘤细胞生物学特性的影响.方法 Western blot检测GLS1在人胃肠道神经内分泌肿瘤中的表达;将正常对照(NS)-小干扰RNA (siRNA)、GLS1-siRNA1、GLS1-siRNA2、GLS1-siRNA3转染人胃肠道神经内分泌肿瘤细胞株BON-1,未转染任何siRNA的作为对照组,Westem blot检测转染后各组细胞中GLS1蛋白表达;细胞计数试剂盒(CCK-8)检测转染12、24、48 h后细胞增殖;细胞转染24 h后,Transwell小室检测细胞侵袭数;Western blot检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化mTOR (p-mTOR)、人核糖体蛋白S6激酶(rps6k)、磷酸化rps6k (p-rps6k)蛋白表达;细胞中加入10 nmol/L mTOR信号通路抑制剂雷帕霉素,检测其对细胞增殖侵袭的影响.结果 GLS1在人胃肠道神经内分泌肿瘤组织中的表达显著高于瘤旁组织(P=0.000);GLS1-siRNA1、GLS1-siRNA2、GLS1-siRNA3组细胞中GLS1蛋白表达水平均显著低于对照组,选择GLS1-siRNA2作为后续研究;GLS1-siRNA组在12、24、48 h的细胞存活率为(85.31±4.42)％、(76.12±2.93)％、(69.22±3.62)％,均显著低于对照组[(97.02±2.21)％、(96.61±1.52)％、(97.11 ±2.32)％;t12 h =4.104,P12 h =0.015;t24 h=10.752,P24 h=0.000;t4s h=11.235,P48 h=0.000];GLS1-siRNA组细胞侵袭数及MMP-2、MMP-9、p-mTOR、p-rps6k蛋白表达水平均显著低于对照组;加入抑制剂后的细胞增殖及侵袭结果与干扰GLS1表达的结果趋势一致.结论 GLS1在人胃肠道神经内分泌肿瘤中呈高表达,抑制GLS1的表达能显著抑制BON-1细胞增殖和侵袭,其机制与mTOR信号通路的调控有关.