肿瘤抗原负载的DC-CIK细胞增殖能力及对肝癌细胞HepG2的杀伤活性研究
Journal of International Oncology(2019)
摘要
目的 观察肿瘤抗原负载的树突状细胞(DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)共培养后的增殖能力及对肝癌细胞HepG2的杀伤活性.方法 采用液氮反复冻融法制备肝癌细胞HepG2抗原.应用血细胞分离机采集健康供血者单个核细胞,诱导并分离出DC、CIK,用肿瘤抗原冲击DC获得Ag-DC,将CIK分为3组,一组为单纯CIK,二组以DC:CIK=1:5比例混合,三组以Ag-DC:CIK=1:5比例混合.3组细胞分别记作:CIK组、DC-CIK组和Ag-DC-CIK组.观察3组细胞的增殖能力和细胞表型,并用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定3组细胞对肝癌细胞HepG2的杀伤活性.结果 3组细胞随着培养时间的延长增殖速度逐渐增快,在共同培养的第9天、第12天和第15天时Ag-DC-CIK的增殖倍数(61.32±1.72、190.83±3.53、399.09±5.60)均明显高于同时间CIK的增殖倍数(22.47±2.07、55.91±1.81、83.20±2.34)和DC-CIK的增殖倍数(40.26±2.49、125.03±4.16、251.55±3.25),3组间差异有统计学意义(F=185.78,P=0.033;F=297.35,P=0.018;F=455.37,P<0.001),进一步两两比较发现,差异均具有统计学意义(均P<0.05).Ag-DC-CIK对HepG2细胞的杀伤活性在效靶比为5:1、10:1和20:1时分别为31.71% ±0.29% 、42.43% ±1.86% 和57.69% ±1.11%,均显著高于CIK组(12.11% ±1.14% 、21.30% ±0.52% 和30.71% ±1.26%)和DC-CIK组(20.06% ±0.67% 、29.89% ±1.37% 和39.11% ±0.92%),3组间差异有统计学意义(F=159.64,P=0.037;F=199.36,P=0.025;F=302.08,P<0.001),进一步两两比较发现,差异均具有统计学意义(均P<0.05).CIK、DC-CIK和Ag-DC-CIK 3组细胞培养至第15天,流式细胞仪分析表明3组细胞均表达CD3+CD8+、CD3+CD56+双阳性细胞,且Ag-DC-CIK组CD3+CD8+、CD3+CD56+双阳性细胞的含量(88.12% ±1.24% 、61.35% ±2.63%)明显高于CIK组(54.37% ±3.08% 、18.22% ±1.83%)和DC-CIK组(69.80% ±1.46% 、39.51% ±2.17%),3组间差异有统计学意义(F=414.32,P<0.001;F=378.60,P<0.001),进一步两两比较发现,差异均具有统计学意义(均P<0.001).结论 肿瘤抗原负载DC后与CIK共培养获得的Ag-DC-CIK细胞的增殖能力和对肝癌细胞HepG2的杀伤活性显著高于CIK细胞和DC-CIK细胞.
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关键词
Dendritic cells,Killer cells,Cell line,tumor
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