肿瘤抗原负载的DC-CIK细胞增殖能力及对肝癌细胞HepG2的杀伤活性研究

目的 观察肿瘤抗原负载的树突状细胞(DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)共培养后的增殖能力及对肝癌细胞HepG2的杀伤活性.方法 采用液氮反复冻融法制备肝癌细胞HepG2抗原.应用血细胞分离机采集健康供血者单个核细胞,诱导并分离出DC、CIK,用肿瘤抗原冲击DC获得Ag-DC,将CIK分为3组,一组为单纯CIK,二组以DC:CIK=1:5比例混合,三组以Ag-DC:CIK=1:5比例混合.3组细胞分别记作:CIK组、DC-CIK组和Ag-DC-CIK组.观察3组细胞的增殖能力和细胞表型,并用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定3组细胞对肝癌细胞HepG2的杀伤活性.结果 3组细胞随着培养时间的延长增殖速度逐渐增快,在共同培养的第9天、第12天和第15天时Ag-DC-CIK的增殖倍数(61.32±1.72、190.83±3.53、399.09±5.60)均明显高于同时间CIK的增殖倍数(22.47±2.07、55.91±1.81、83.20±2.34)和DC-CIK的增殖倍数(40.26±2.49、125.03±4.16、251.55±3.25),3组间差异有统计学意义(F=185.78,P=0.033;F=297.35,P=0.018;F=455.37,P<0.001),进一步两两比较发现,差异均具有统计学意义(均P<0.05).Ag-DC-CIK对HepG2细胞的杀伤活性在效靶比为5:1、10:1和20:1时分别为31.71％ ±0.29％ 、42.43％ ±1.86％ 和57.69％ ±1.11％,均显著高于CIK组(12.11％ ±1.14％ 、21.30％ ±0.52％ 和30.71％ ±1.26％)和DC-CIK组(20.06％ ±0.67％ 、29.89％ ±1.37％ 和39.11％ ±0.92％),3组间差异有统计学意义(F=159.64,P=0.037;F=199.36,P=0.025;F=302.08,P<0.001),进一步两两比较发现,差异均具有统计学意义(均P<0.05).CIK、DC-CIK和Ag-DC-CIK 3组细胞培养至第15天,流式细胞仪分析表明3组细胞均表达CD3+CD8+、CD3+CD56+双阳性细胞,且Ag-DC-CIK组CD3+CD8+、CD3+CD56+双阳性细胞的含量(88.12％ ±1.24％ 、61.35％ ±2.63％)明显高于CIK组(54.37％ ±3.08％ 、18.22％ ±1.83％)和DC-CIK组(69.80％ ±1.46％ 、39.51％ ±2.17％),3组间差异有统计学意义(F=414.32,P<0.001;F=378.60,P<0.001),进一步两两比较发现,差异均具有统计学意义(均P<0.001).结论 肿瘤抗原负载DC后与CIK共培养获得的Ag-DC-CIK细胞的增殖能力和对肝癌细胞HepG2的杀伤活性显著高于CIK细胞和DC-CIK细胞.