REIC/Dkk-3基因对肾癌细胞786-0的影响及作用机制

目的 探讨REIC/Dkk-3基因是否具有杀伤肾癌细胞786-0的作用及其机制.方法 采用REIC/Dkk-3基因过表达载体(pEZ-M29-REIC/Dkk-3)转染786-0细胞,分别于转染24、48、72、96 h后行细胞计数试剂盒(CCK-8)检测其对786-0细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪膜联蛋白V(Annexin V)/碘化丙锭(PI)双染法检测其对786-0细胞诱导细胞凋亡的影响,PI单染法检测周期阻滞效应,Western blot法检测凋亡和周期阻滞相关蛋白的表达.结果 Western blot和实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)结果显示转染REIC/Dkk-3基因后其表达量较对照组升高5倍多.CCK-8结果显示,随着作用时间的增加,786-0细胞的增殖抑制率逐渐增加,处理24、48、72、96 h后对照组细胞存活率为92.0％、90.0％、84.0％、80.5％,REIC/Dkk-3过表达组分别为89.50％、73.75％、63.00％、58.50％,与空质粒组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).流式Annexin V/PI双染法显示REIC/Dkk-3可诱导肾癌细胞凋亡,过表达组、空载体组、空白对照组凋亡率分别为28.5％、7.2％、0.6％,Western blot结果显示REIC/Dkk-3可上调活化酪半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(cleavedCaspase-3)和下调B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)的表达.细胞周期结果显示REIC/Dkk-3可诱导肾癌细胞发生G1期阻滞,过表达组、空载体组、空白对照组G1期比例分别为(69.90±3.40)％、(59.57±1.20)％和(52.57±1.20)％;Western blot结果显示REIC/Dkk-3过表达可上调p21和下调细胞周期素D1(Cyclin Dl).结论 REIC/Dkk-3可抑制肾癌细胞786-0的增殖,可能是通过诱导发生细胞凋亡和G1期阻滞实现的.