NGHIÊN CỨU TÁCH DÒNG, BIỂU HIỆN VÀ TINH CHẾ TEV PROTEASE Ở VI KHUẨN Escherichia coli

Một trong cac thach thức đặt ra đoi vơi cong nghe protein tai to hơp đo la khả năng biểu hiện va tinh sạch cac protein tai tổ hợp trong tế bao vật chủ, do một số protein khong thể biểu hiện hoặc biểu hiện ở dạng khong co hoạt tinh/chức năng sinh học mong muốn, thậm chi con gây độc cho vật chủ biểu hiện. Để khắc phục nhược điểm nay, protein đich thường được biểu hiện dưới dạng protein lai với một số loại protein dung hơp khac như: Thioredoxin (Trx), Glutathione S transferase (GST), NusA, Maltose binding protein (MBP), Histidin (His)… Tuy nhien cac protein dung hơp lại gây ra nhiều hạn chế khi ứng dụng protein tai tổ hợp vao thực tế như: gây nhiễu hoặc tạo phản ứng dương tinh/âm tinh giả của kit chẩn đoan, gây dị ứng hoặc cac nguy cơ khac của dược phẩm hoặc vaccine,...Do đo protein dung hơp cần phải được xử li cắt bỏ khỏi protein đich nhơ cac protease căt đăc hieu. Do tinh đăc hieu cao, TEV protease (TEVp), mot protease tư Tobacco Etch Virus (TEV) gây bệnh ở thực vật, hiện đươc lưa chon cho muc đich tren. Gen ma hoa TEVp đươc khuech đai băng phản ứng RT-PCR, dong hoa vao vector bieu hien pET-21a(+) tao plasmid tai to hơp pETEVp va bien nap vao te bao E.coli chung BL21 (DE3) đe bieu hien gen đich. Ket qua nghien cưu cho thây, ơ đieu kien nhiet đo 37 °C, 30 °C va 25 °C, TEVp được bieu hien ơ dang the vui nhưng ơ 18 °C enzyme nay ton tai chu yeu ơ dang hoa tan. Đieu kien toi ưu cho bieu hien cua protein tai to hơp cung đa đươc xac đinh. TEVp tai to hơp (rTEVp) đươc tinh che băng cot săc ki ai lưc Ni-NTA trong đieu kien tư nhien vơi đo tinh sach cao.