钙调蛋白磷酸酶B亚基生物学活性检测方法建立

建立钙调蛋白磷酸酶B亚基(calcineurin subunit B,CNB)生物活性检定方法用以质量控制.CNB能促进钙调蛋白磷酸酶A亚基(CNA)的突变体CNAA316的活性,增强其分解底物对硝基苯磷酸二钠(p-nitro-phenylphosphate,pNPP)的能力.采用四参数方程对不同浓度CNB和相应的pNPP最大分解速率进行拟合,用平行线分析法对供试品和参考品进行量值传递,得到供试品的活性值.然后对该方法的准确度、精密度、线性、线性范围、灵敏度、特异性和耐久性进行验证.回收率结果均在98％以上,板内精密度为6.7％,板间精密度为10.8％,决定系数大于0.98,线性范围为0.05～50 μtg/mL,灵敏度为50 μg/mL.部分细胞因子无法促进CNAA316分解底物pNPP的能力.在一定范围内,CNA△316浓度对检测结果没有影响.