整合素连接激酶对瘢痕成纤维细胞增殖和分化的影响

目的 观察整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)对人瘢痕成纤维细胞增殖和分化的影响,以探讨其在瘢痕形成中的作用.方法 体外分离培养瘢痕成纤维细胞,并按下述方法处理并分组:①空白对照组,仅含有常规高糖DMEM培养液;②转染试剂jetPRIMETM对照组(jetPRIMETM对照组),常规高糖DMEM培养液与200μl jetPRIMETM buffer及4μl jetPRIMETM反应试剂;③ILK小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)组(ILK siRNA组),常规高糖DMEM培养液与siRNA转染复合物;④ILK互补DNA(complementary DNA,cDNA)组(ILK cDNA组),常规高糖DMEM培养液与cDNA转染复合物.分别检测细胞增殖、ILK信使RNA(messenger RNA,mRNA)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)mRNA表达及其蛋白表达水平.结果 ①四唑鎓盐(XTT)检测结果表明,转染后48 h,各组成纤维细胞增殖水平,空白对照组为0.820±0.065,jetPRIMETM对照组为0.873±0.041,ILK siRNA组为0.554±0.013,ILK cDNA组为1.296±0.094.各组48 h内的细胞增殖曲线见,ILK siRNA组的细胞增殖极为平缓,而ILK cDNA组的细胞增殖水平从12 h开始逐渐升高.转染后48 h,ILK siRNA组细胞增殖水平明显低于其他3组(P值分别为0.021、0.034、0),ILK cDNA组细胞增殖水平明显高于其他3组(P值分别为0.017、0.009、0).②实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time qPCR)技术检测结果显示,ILK mRNA和α-SMA mRNA的表达水平,空白对照组为0.693±0.412和0.422±0.037,jetPRIMETM对照组为0.621±0.183和0.388±0.005,ILK siRNA组为0.052±0.019和0.073±0.023,ILK cDNA组为240.193±35.170和138.056±24.060.ILK siRNA组ILK mRNA和α-SMA mRNA表达水平均显著低于其他组,差异有统计学意义(P＜0.05);而ILK cDNA组ILK mRNA和α-SMA mRNA表达水平均显著高于其他3组,差异有统计学意义(P＜0.05).③应用Western blot检测发现ILK siRNA组的ILK及α-SMA蛋白表达明显受到抑制,而ILK cDNA组的ILK及α-SMA蛋白表达均明显增加.结论 ILK对成纤维细胞增殖具有促进作用,并能够在转录和翻译水平对α-SMA进行上调控制,可能通过促进成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化,并在瘢痕的形成与挛缩中起到重要作用.