谷氨酰胺对RAW264.7细胞HSP 72表达和TNF-α释放的影响

目的 探讨不同条件下谷氨酰胺(Gln)对小鼠腹腔巨噬细胞株RAW264.7热休克蛋白(HSP)72表达和肿瘤坏死因子(TNF)-α释放的影响. 方法 将RAW264.7细胞与含Gln(0、0.5和8 mmol/L)的培养液分别进行下列处理:①共同培养165 min后,加入脂多糖 (LPS)刺激0、1、4、12和24 h;②共同培养的同时行热应激预处理45 min,37℃培养2h后加入LPS刺激4 h;③共同培养的同时行DON预处理,165 min后加入LPS刺激4 h;④两者与含LPS的培养液共同培养1 h,改用含0.5 mmol/L Gln和LPS的培养液继续培养4 h.ELISA法检测细胞上清液TNF-α的浓度,Western blotting检测细胞HSP 72蛋白表达.结果 ①LPS刺激后4 h,RAW264.7细胞均有HSP 72表达,经8 mmol/L Gln培养者较经0和0.5 mmol/L Gln培养者HSP 72表达显著增加(P<0.01),而24 h时三者HSP 72表达差异无统计学意义(P>0.05);Gln促进TNF-α释放,与Gln呈时间和浓度依赖关系.②热应激显著促进Gln 诱导的HSP 72表达(P<0.01),抑制Gln 诱导的TNF-α释放,但TNF-α释放仍随Gln浓度增加而增加.③DON预处理不影响HSP 72的表达,但显著抑制TNF-α释放(P<0.01).④短时间不同浓度Gln处理,与0.5和8 mmol/L Gln共同培养者较与0 mmol/L Gln 共同培养者HSP 72表达显著增加(P<0.01);TNF-α的释放随Gln浓度增加有升高趋势,但三者间差异无统计学意义(P>0.05).结论 Gln可诱导RAW264.7细胞表达HSP 72,但并不足以抑制其TNF-α释放.除诱导HSP 72表达外,Gln在脓毒症时调节机体炎症反应还可能存在其他机制.