FasL基因构建蛋白表达及其对胃癌细胞株BGC823和MGC803生长的影响

目的:构建适于原核表达的重组蛋白FasL表达载体,并进行重组蛋白的表达纯化及抗肿瘤活性分析.方法:获得人FasL cDNA全序列,将其分段设计引物,通过重叠PCR获得FasL基因.构建pGEX-5X-1/FasL表达载体.转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,GST柱纯化.采用MTT比色法、流式细胞法检测融合蛋白对胃癌细胞的作用.结果:通过重叠PCR获得了编码正确氨基酸序列的目的基因.表达的目的蛋白表达量占菌体总蛋白的30%以上.纯化后,蛋白纯度达95%rX上.MTT比色法与流式细胞技术均表明纯化的融合蛋白能抑制胃癌细胞株BGC823和MGC803的生长,诱导其调亡增加.结论:重组蛋白FasL表达载体的成功构建、表达、纯化及活性分析,为进一步的抗肿瘤功能研究奠定了基础.