叶酸受体α真核表达载体的构建及在HEK293细胞中表达的鉴定
Pharmaceutical biotechnology（2013）
摘要
从高表达叶酸受体α的卵巢癌细胞株SKOV3中提取总RNA,RT-PCR扩增FRα基因片段,使用HindⅢ和EcoRⅠ双酶切后克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中,对其进行酶切及测序鉴定；用脂质体介导法将重组质粒转染入人胚肾细胞HEK293中,并利用RT-PCR、Western blot及细胞免疫荧光染色检测细胞内FRα基因的表达情况.通过RT-PCR扩增得到750 bp左右的FRα基因片段,并构建了真核表达重组质粒,经酶切、测序鉴定正确.转染HEK293细胞后,RT-PCR检测到细胞中FRα mRNA的存在,Western blot、细胞免疫荧光证明FRα蛋白在细胞中的表达.成功构建了FRα基因的真核表达重组质粒,该质粒可在真核细胞中表达FRα蛋白,这些实验结果为卵巢癌基因疫苗的研究奠定了基础.
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