条件培养基对日本血吸虫童虫培养细胞LDH及AgNORs的影响

目的 以乳酸脱氧酶(LDH)及核仁组织区相关嗜银蛋白(AgNORs)为评价指标,观察条件培养基对日本血吸虫童虫培养细胞的影响.方法 灌注法获取21 d虫龄的日本血吸虫虫体,冷消化法制备细胞悬液,调细胞为1×106个/ml,联合法接种细胞.将接种于小盖玻片上的血吸虫细胞随机分为对照(0 h)组和24、48、72 h 3个实验组共4组.对照组用常规培养基即RPMI-1640含20%小牛血清附加常量抗生素(青霉素1×105U/L,链霉素100 mg/L)培养,实验组培养基为常规培养基分别与培养24、48、72 h的鼻咽癌细胞上清液的条件培养基1:1的混合液.培养第7天,对培养细胞进行LDH及AgNORs染色;每组随机选取300个LDH染色细胞、50个AgNORs染色细胞输入HPIAS-2000图像分析仪测定培养细胞的吸光度(A)值,并作统计分析.结果 日本血吸虫童虫细胞在不同条件培养基作用下,其LDH及AgNORs着色均比对照组深,其中72 h组细胞着色最深,其次是48 h组,再是24 h组,对照组细胞着色最浅.条件培养基培养的各组细胞,LDH含量及AgNORs A值显著大于对照组细胞(q24=8.528 7,q48=15.425 3,q72=27.620 7,P均<0.01;q24=13.569 0,q48=18.728 8,q72=27.035 6,P均<0.01).72 h的条件培养基作用日本血吸虫童虫细胞后,培养细胞的LDH含量及AgNORs A值明显较对照组高(q0/72=27.620 7,P<0.01;q0/72=27.035 6,P<0.01),亦高于其他组(q24/72=19.0919,q48/72=11.842 6,P均<0.01;q24/72=13.569 0,q48/72=18.728 8,P均<0.01).结论 条件培养基可明显增强日本血吸虫童虫培养细胞LDH的活性及增加AgNORs的含量,且72 h的条件培养基对童虫培养细胞的影响最大.